非水反相色譜法應用案例及注意事項

非水反相色譜法（NARP）為反相色譜法的一種特殊模式，主要用來分離疏水性很強不溶于水的樣品如脂類、合成聚合物等，這些樣品的保留能力很強，流動相全部由有機溶劑組成，不使用強極性的水溶液。非水反相高效液相色譜法可做為脂溶性藥物和非極性含氮有機化合物及其鹽類藥物的常規分析方法[1]，中藥中的一大類有效成分脂溶性大，不溶于水，甚至也難溶于甲醇，因此非水反相色譜也常應用于中藥質量控制[2]。

月旭科技色譜柱應用于某中藥配方顆粒中甘油酯類樣品分析案例如下：

非水反相色譜中的流動相是由極性較強的有機溶劑A和極性較弱的有機溶劑B組成。A溶劑常用乙腈或甲醇，B溶劑常用四氫呋喃、異丙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚或者其他極性較弱的有機溶劑。

非水反相色譜法方法優化同反相色譜法，主要通過改變%B或B溶劑的極性來調節，等度或梯度都能使用，同時柱溫對樣品的分離也有影響。一般shou選采用ACN（A）和THF（B）的混合溶劑為作為初始流動相。若用100%THF樣品保留仍太強，可以用極性較弱B溶劑（如二氯甲烷或氯仿）來替換，但是要考慮使用二氯甲烷或氯仿的檢測波長。

需注意，在使用非水反相色譜時，需要將整個系統和色譜柱中的水相徹di沖洗過渡，儀器系統應保證已升級到正相，避免硬件損傷。

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[1] 《非水反相高效液相色譜法在非極性藥物分析中的應用研究》

[2]《非水反相液相色譜法在中藥質量控制中的應用》